AimGel - 小鼠T细胞激活类胞微球 CD3/CD28

产品描述

Aim-Tconv是一种水凝胶微颗粒（HMP）悬液，旨在有效激活和扩展人类泛T细胞。Aim-Tconv HMP设计为在培养环境中大约14天内自行降解。如需进行任何后续处理（例如计数、流式细胞技术），若希望提前降解Aim-Tconv HMP，请使用试剂盒中提供的HMP降解剂进行降解。

产品详情

本试剂包含以下组分：

• 每管内含 1.0毫升水凝胶微球（HMP）悬液。
• 每毫升内含4×10⁷ HMP，缓冲液为pH7.4 PBS。
• HMP降解剂（10X），1.0毫升。
• HMP表面覆盖了磷脂膜，膜表面嵌合了多种T细胞激活蛋白信号。

稳定性和存储建议：

• 附冰运输，在4°C下可稳定保存9个月。
• 未开封的管中内容物经无菌处理。
• 收到产品后，请将其放在冰箱（2到8°C）中保存。
• 切勿置于冷冻（低于0°C）或高温（高于40°C）环境。

详细信息请查看完整说明书。

所需额外试剂：

• 冷冻保存或新鲜分离的人类泛T细胞（Pan T cell），或已纯化的CD3+T细胞。
• 含2mM L-谷氨酰胺的RPMI-1640或其他兼容培养基。
• 热灭活的胎牛血清（FBS）
• 青霉素/链霉素（P/S）
• 2-巰基乙醇
• 重组人 IL-2 （rIL-2）
• 组织培养板或培养瓶
• 培养箱或生物反应器

建议产品使用步骤

1 培养基

RPMI + 10% FBS+ 1% P/S +20~50 wM2-巰基乙醇+30 to 100 U/mL rIL-2， 或其他相容培养基。

2 预备HMP

重悬Aim-Tconv™ 水凝胶微球（Aim-Tconv™ HMP，以下简称HMP）。

3 种HMP

计算每孔所需的HMP体积，用培养基稀释HMP至适当浓度，分装至培养皿。

• 建议HMP浓度：每毫升2×10⁵至3×10⁵ HMP。
• 建议HMP与PBMC比例：2:1。
• 建议HMP与T细胞比例：1:1

在此查看细胞接种方案。

4 种细胞

重悬T细胞悬浮液，分装至含有HMP的培养皿中。

轻柔地移液混合3至5次。在显微镜下确认HMP与细胞已均匀混合分布。

5 培养扩增

将培养皿置于37°C，5% CO₂，培养箱孵育。隔天观察细胞形态和覆盖度。加入HMP头四天请勿扰动，避免干扰HMP与T细胞之间的相互作用。

6 清除HMP

•HMP在培养环境可自动水解（约14日）。待HMP完全水解后只需离心清洗。

• 另外，也可以使用试剂盒中提供的HMP降解剂，将其酶解无毒的聚合物。需稀释到1X浓度，在37°C条件下孵育1-2小时，HMP将被完全降解

7 重激活（可选）

T细胞在扩增10天后生长率会降低。此时可加入新的HMP重新激活。重激活时建议HMP与T细胞比例为0.5:1至1:1。

注意事项

当开始培养时

为了使HMP达到最佳激活效率，请在种细胞时充分混合细胞与HMP。

当观察到细胞团簇时

随着时间的推移，HMP 和细胞倾向于聚集在孔的中心。轻轻摇动培养板以重新分布 HMP 和细胞。

避免在开始后四天内进行移液混合，干扰 HMP-细胞团簇可能会导致细胞死亡。

何时添加新培养基或分盘？

通过定期进行细胞取样和计数来定期监测T 细胞的生长情况。

补充新鲜培养基或转移全部细胞至新培养皿中。

• 当培养基颜色变橙黄色（酸性条件，约pH 6.5）。
• 当细胞密度大于每毫升3×10⁶细胞，调整至每毫升 0.5-1×10⁶细胞。

何时需重新激活？

在初期激活后9至11天。

Yu博士, SPH生物治疗公司的研究科学家

AimGel™ T细胞激活珠对T细胞具有很好的激活效果，有效增强了CD3阳性T细胞的扩增。它们对后续转染也有积极影响！我将继续购买用于未来的实验！

Sam博士, InnoCellular Tech公司的研究科学家

使用AimGel™原型是我们T细胞扩增和激活过程中的一次突破。它可定制的表面信号比率使我们能够精确靶向和扩增指定的免疫细胞群体。这个平台无烦恼且非常易于使用！它简化了我们的工作流程，提高了我们在免疫细胞扩增方面的整体效率！

以下是使用 Aim-Tconv 的主要优点：

1. 高效扩增：我们的 AimGel HMPs 显示出比 aCD3/aCD28 磁珠更高的 T 细胞激活。
2. 更多且更持久的记忆细胞：富集我们的 AimGel HMPs的 T 细胞相比于 aCD3/aCD28 磁珠，显示出更高的中心记忆和效应记忆 T 细胞亚群。
3. 更少衰竭：富集我们的 AimGel HMPs 的 T 细胞相比于 aCD3/aCD28 磁珠，表现出更少的衰竭。
4. 自然的细胞间相互作用：流体脂质膜使得细胞间的相互作用接近自然状态。
5. 无需去珠步骤：可降解的水凝胶颗粒消除了去珠步骤的需要。

推荐参数：

• 建议Aim-TconvHMP浓度：每毫升2×10⁵至3×10⁵ HMP。
• 建议Aim-TconvHMP与PBMC比例：2:1。
• 建议Aim-TconvHMP与T细胞比例：1:1
  

Aim-Tconv HMP 会在一段时间后通过水解自行降解。

可以使用试剂盒中提供的HMP降解剂將Aim-Tconv HMP 酶解为无毒的聚合物成分。

是的，与 Aim-Tconv HMP 孵育后，T 细胞激活有可见的迹象。激活的 T 细胞通常表现出以下特征：

1. 形态变化：激活的 T 细胞比静息状态的 T 细胞大，形状不规则，而静息 T 细胞较小且呈圆形。
2. 表面标记：用适当的荧光抗体染色细胞，使用流式细胞仪对染色的细胞进行表征。有关哪些标记对应特定 T 细胞类型的信息，请参阅说明书的第 2 页。

随着时间的推移，HMP 和细胞倾向于聚集在孔的中心。轻轻摇动培养板以重新分布 HMP 和细胞。

避免在开始后四天内进行移液混合，干扰 HMP-细胞团簇可能会导致细胞死亡。

T细胞在扩增10天后生长率会降低。此时可加入新的HMP重新激活。重激活时建议HMP与T细胞比例为0.5:1至1:1。